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影響親和色譜柱的因素有哪些?

更新時(shí)間:2016-10-14瀏覽:3283次

影響親和色譜柱的因素有:

1)上樣體積

若目標(biāo)產(chǎn)物與配基的結(jié)合作用較強(qiáng),上樣體積對(duì)親和色譜效果影響較小。若二者間結(jié)合力較弱,樣品濃度要高一些,上樣量不要超過色譜柱載量的5%~10%。(這個(gè)載量是什么意思,是指柱子所能吸附的zui大量嗎。。求大神解釋T ^T)

2)柱長(zhǎng)

親和柱的長(zhǎng)度需要根據(jù)親和介質(zhì)的性質(zhì)確定。如果親和介質(zhì)的載量(同上 求解釋T ^T)高,與目標(biāo)產(chǎn)物(目標(biāo)物)的作用力強(qiáng),可以選擇較短的珠子(柱子);相反,則應(yīng)該增加柱子的長(zhǎng)度,保證目標(biāo)產(chǎn)物與親和介質(zhì)有充分的作用時(shí)間。

3)流速

親和吸附時(shí)目標(biāo)產(chǎn)物與配基之間達(dá)到結(jié)合反應(yīng)平衡需要一個(gè)緩慢的過程。因此,樣品上柱的流速應(yīng)盡量的慢,保證目標(biāo)產(chǎn)物與配基之間有充分的時(shí)間結(jié)合,尤其是二者間結(jié)合力弱和樣品濃度過高時(shí)。

4)溫度

溫度效應(yīng)在親和色譜中比較重要,親和介質(zhì)的吸附能力受溫度影響,可以利用不同的溫度進(jìn)行吸附和洗脫。一般情況下親和介質(zhì)的吸附能力隨溫度的升高而下降,因此在上樣時(shí)可選擇較低的溫度,使待分離物質(zhì)與配基有較大的親和力,充分地結(jié)合;而在洗脫時(shí)刻采用較高的溫度,使待分離物質(zhì)與配基的親和力下降,便于待分離物質(zhì)從配基上脫落。

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