C18反相色譜柱的操作與清洗

C18反相液相色譜柱是一種常用的色譜柱產(chǎn)品，主要由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成，被廣泛用于多個(gè)領(lǐng)域中。在c18反相液相色譜柱的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性，延長(zhǎng)柱子的使用壽命非常重要。使用時(shí)間后就會(huì)出現(xiàn)柱壓升高、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時(shí)間改變等變化，如不采取措施，將會(huì)縮短色譜柱的使用壽命，影響工作效率，并造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。

 

C18反相色譜柱操作步驟：

 

1.平衡開(kāi)始時(shí)將流速緩慢地提高，用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(xiàn)（緩沖鹽或離子對(duì)試劑流速如果較低，則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡）

2.如果使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水”過(guò)渡”即每天分析開(kāi)始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡；分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。

 

C18反相色譜柱的清洗：

 

1、如果您的樣品分析只用到一般的甲醇，乙腈和水的流動(dòng)相(包括流動(dòng)相里面加了點(diǎn)酸)，在做完樣品后可直接用65％的乙腈/水或者純甲醇進(jìn)行清洗40～60mins即可保存；

 

2、如果您的樣品分析用到了含緩沖鹽或者酸或者離子對(duì)試劑的流動(dòng)相，在做完樣品后的清洗必須按照下列2個(gè)步驟進(jìn)行清洗柱子(不論您的柱子是否是可以過(guò)純水的極性柱子還是一般的通用性柱子)：

a、重要的步驟——用5％的乙腈(甲醇)/水，清洗80ml溶劑以上(250mm色譜柱，150長(zhǎng)度的柱子需要至少60ml溶劑清洗)，1~2ml/min(根據(jù)時(shí)間自由調(diào)節(jié)流速；LC/MS柱子應(yīng)以0.2ml/min的流速進(jìn)行)，如果因?yàn)闀r(shí)間來(lái)不及而清洗不了那么長(zhǎng)時(shí)間，可以適當(dāng)加大流速，比如1.5 or 2ml/min；

b、65％的乙腈（甲醇）/水或者純甲醇/乙腈，清洗30～60mins，1~2ml/min。